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              分享哺乳動物細胞培養的9個基本技巧!

              發布時間: 2021-09-22  點擊次數: 1489次

              一、凈化空氣

              在開始任何組織培養工作之前,打開新風系統至少15分鐘,確保有清潔的空氣流入。要始終確保沒有任何東西覆蓋它。每周打開紫外線燈3-4次,最多半個小時,可以幫助保持你的實驗室無污染,但你應該記住,紫外線只會殺死它直接照射到的微生物。紫外線照射對眼睛和皮膚也是有害的,所以在使用遮光罩時,請保持光線關閉。在工作前后用消毒劑擦拭超凈臺(大多數人使用70%的乙醇,但你也可以使用Incidin濕巾)。


              二、遠離污染物

              雖然你很可能是實驗的主要污染源,但是你*有必須要采取你所及的的預防措施,防止細胞受到污染。用70%乙醇擦拭實驗室的所有東西,包括你戴手套的手!你還應該在開始之前把所有的珠寶和你戴的手表都取下來。此外,避免不必要的交談,因為交談會產生微生物氣溶膠,可能會進入超凈臺。在進入實驗室前*計劃你的實驗是另一個防止污染的好方法。這聽起來很瑣碎,但往往能在問題出現之前解決大多數問題。有了適當的計劃,你就可以確切地知道你需要把什么材料帶進實驗室,并且可以帶入之前把它們都擦干凈。


              三、分裝試劑,保持實驗室整潔

              儲物柜最好不要帶護罩。雜亂無章不僅使你的工作區很難清潔干凈,而且還會破壞工作區周圍的層流氣流。確保只將所需材料帶入工作區域。這將給你足夠的空間自由移動而不會造成泄漏。另外,當液體容器不能立即使用時,請將其蓋緊。防止泄漏,但如果發生任何泄漏,應立即用70%乙醇擦拭。最后,避免將移液管直接插入培養基瓶中,而應先將溶液倒入一次性無菌管中,分裝使用不但能方便管理更能避免出現大規模的污染。


              四、確保細胞不要離開培養箱太久

              當你準備東西的時候,確保你的細胞不會在外面呆太久。培養箱的舒適區通常在37度左右°5%的二氧化碳,溫度突然變化(尤其是開空調的時候)會讓細胞變得焦躁不安,所以把它們放在無菌培養箱中。這也意味著任何與細胞接觸的培養基或洗滌緩沖液,如PBS(磷酸鹽緩沖鹽水),都應該在37°C.這也是大多數實驗室都有一個37度的水浴目的。


              五、注意細胞的形狀和大小

              你應該在超凈臺附近放一個光學顯微鏡,這樣你可以定期觀察你的細胞(在進入實驗室之前和將它們放入培養箱時)。這也有助于熟悉你正在使用的細胞系的形態,以便識別交叉污染。即使某些哺乳動物細胞系具有相似的形態,但是觀察細胞是否污染,顯微鏡一定不可少。


              六、合理的設置細胞傳代

              不要偷懶于分割細胞,而要形成一個常規。對于大多數快速生長的細胞系(如HEK293,每16小時增殖一次),一周兩次通常有效。例如,如果你在星期一將細胞稀釋1:5進行傳代,你應該可以在下一個星期四,或者最遲在星期五進行分裂。最好在細胞板80-85%匯合之前分裂細胞,因為細胞這個時候屬于生長鼎盛期。如果它們達到匯合點,就會進入平頂期,它們就會停止生長(接觸抑制),經過傳代后需要時間才能恢復。這可能會改變它們的生長速率和形態,使得它們不適宜繼續用于需要可復制結果的實驗。大多數細胞培養基含有pH指示劑酚紅(pH范圍6.0(黃色)-8.0(紅色))。血液pH值通常在7.35-7.4左右,因此哺乳動物細胞對pH值很敏感。橙色和淺橙色之間的顏色通常都表明細胞需要換液或者已經足夠生長,通過分泌乳酸(細胞代謝的副產物,對細胞有毒)使周圍的介質變酸,這個時候若細胞密度太大就選擇傳代。


              七、細胞狀態就是力量!

              當用一個新的細胞系開始培養時,將細胞生長,將其等分成若干小瓶,冷凍,除一個外,其余全部儲存在液氮中。冷凍的小瓶組成了你的主庫存,而你可以用剩下的小瓶來生長和冷凍額外的細胞,這些細胞可以作為你的工作庫存。這可以確保您有許多細胞儲存在其原始狀態,一旦工作細胞變得太老化或污染。您還有之前的庫存細胞可以取代。這也確保了任何在實驗室需要新細胞的人都可以帶上一瓶“原始狀態"的主庫存,而不是“借用"已經經過多次傳代并可能被污染的細胞。


              八、注意實驗用的細胞代次

              注意傳代次數。細胞在高傳代數(>30-40倍)時會改變它們的生長速度和形態,這取決于細胞系,所以舊細胞應該退役!相反,第3-4代年輕的細胞太年輕,不應該在立即用于重要的轉染實驗。額外的傳代可以讓你的細胞獲得穩定的生長速度。

              在你的盤子和/或燒瓶上貼上你的名字、日期、你使用的細胞系和它的通道號是一種很好的做法。特別是在一個多人從事不同工作的實驗室里,這將有助于你避免意外混合造成交叉污染,也有助于你保持良好的實驗記錄。


              九、及時滅菌是細胞的狂歡!

              最后,但并非最不重要的一點是,任何用于再利用的實驗室材料(例如,用于液體廢物的巴斯德移液管)在每次使用前都應消毒。此外,所有受污染的液體和固體廢物在處理前應進行高壓滅菌。

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