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              6個小細節,輕松搞定細胞“劃痕實驗”

              發布時間: 2021-09-28  點擊次數: 1804次

              傷口愈合試驗,也通常稱為“劃痕試驗",是一種廣泛建立的研究體外集體細胞遷移的技術。細胞劃痕(Wound Healing)是一種操作簡單,經濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。其實驗原理是,當細胞長到融合成單層狀態時,在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域,稱為“劃痕"。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕"愈合。


              條件好的實驗室可使用活細胞成像來分析創傷愈合實驗中角質形成細胞或者成纖維細胞的遷移活動。結合包含的軟件分析算法,有可能延遲量化間隙表面關閉和關閉推移時間的速度,但是使用延時顯微鏡獲取數據的優點是,可以在恒溫箱內確定和穩定的條件下記錄傷口分析。

               

              通常,用于傷口愈合試驗的細胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細胞系和原代細胞經常被用作這方面的模型。較為常用的細胞類型是角質形成細胞和成纖維細胞。

               

              那么制作劃痕實驗需要注意些什么呢?

              1. 細胞的密度;劃痕實驗一般是幾種細胞的結合,但是每種細胞的生長速度會不一樣,所以需要按照細胞的生長特性調整培養時間,細胞鋪滿孔底時劃痕的效果會比較好,建議是100%的鋪滿。

              2. 用槍頭畫線時盡量垂直,以6孔板為例 ,一個孔可以畫6條線

              3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次,以去除劃下的細胞

              4. 注意培養方式一定要改成無血清或者低血清的培養基,因為:劃痕后用無血清培養基培養細胞,意在說明在監測的 24 小時內,劃痕的縮小是細胞 遷移作用的結果,所以要將細胞增殖造成細胞遷移的影響降到最小低;但若細胞改成無血清培養后大面積漂浮,需要適量加入血清濃度不能高于2%。

              5. (5)放入37℃ 5% CO2培養箱,培養。我們按0,10,12,15時間點取樣,拍照(具體時間依實驗需要而定)。

              6. (6)統計方法:使用Image J軟件打開圖片后,抓取自己畫的線條,計算細胞間距離的平均值。


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